Aplicación de PCR y qPCR en la detección del VPH

Tema: Detección del VPH en muestras de mucosa oral en pacientes pediátricos

Objetivo: Evaluar la sensibilidad de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección del VPH en diferentes muestras.

Muestra: Mucosa oral 

Tipo de ácido nucleico: ADN viral.

Extracción: Se extrajo utilizando el kit de extracción de ADN genómico PureLink (Invitrogen, Carlsbad, California, EE. UU.), siguiendo las recomendaciones del fabricante.

Genes a analizar: Gen L1 

Tamaño en pares de base: 150 pb del gen a amplificar

Tipo de PCR: PCR convencional y PCR en tiempo real (qPCR).

Pasos:

40 ciclos 

- Desnaturalización: 15 segundos a 95 °C

- Hibridación: 30 segundos a 60 °C

- Elongación: 30 segundos a 72 °C

 Al final de los ciclos, las muestras se sometieron a análisis de disociación a 65°C-95°C.

Visualización:

 

 Referencia Bibliográfica:

 1. Gama AR. Detección del VPH en muestras de mucosa oral en pacientes pediátricos. [Online]; 2020. Acceso 16 de diciembrede 2023. Disponible en: https://www.scielo.br/j/jbpml/a/mkTHfmYWp9f4nXhzbCkfb9p/?format=html&lang=pt#