Terapia epigenomica en el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC)

Tema: Actividad de algunos Agomirs y Antigomirs como supresor del carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC).

Mecanismo epigenómico tratado: Silenciamiento génico por ncRNA (MicroARNs).

Cómo se lo hizo: Se transfirieron tres formas de ARN no codificante en líneas celulares: incluyeron agomirs de microARNs (miRNA-135a y miRNA-34a), moléculas antisentido de ARN largo no codificante (HOTAIR), y antagomirs correspondientes. Se evaluó la viabilidad celular con XTT y la eficiencia de transfección se determinó mediante qPCR en tiempo real.

Resultados: Los resultados mostraron una significativa viabilidad celular con miARNs 135a y 34a, y HOTAIR, agomirs, antagomirs y moleculas antisentido del mismo RNA no codificante, además la expresión génica en la línea celular A549 mostró cambios tras la transfección, sugiriendo una prometedora terapia para carcinoma pulmonar.

Referencia bibliográfica:

1.	Mosa ZSAd, Aubaid AH. The activity of some Agomirs and Antigomirs. [Online]; 2023. Acceso 24 de febrerode 2024. Disponible en: https://www.revhipertension.com/rlh_5_2023/4_the_activity_some_agomirs.pdf.

Técnicas de Edición de Ácidos Nucleicos en la Hemofilia A y B

Artículo: La administración in vivo de CRISPR-Cas9 mediante nanopartículas lipídicas permite la edición génica de la antitrombina para el tratamiento sostenible de la hemofilia A y B

1.- Tipo de Edición (in vivo o ex vivo, somática o germinal): Edición in vivo, somática.

2.- Dirigido hacía: El gen SERPINC1, que codifica la antitrombina.(AT)

3.- Dirigido por: sgRNA y SpCas9

4.- Uso de vectores: Nanopartículas Lipídicas (LNP)

5.- Órgano a tratar: Hígado

6.- Vía de administración: Administración por vía intravenosa

7.-Resultados a corto, mediano y largo plazo:

Corto plazo: Reducción significativa de la concentración de antitrombina en sangre, mejora la generación de trombina y se reducen la hemorragia espontánea en modelos animales de hemofilia.

Mediano plazo: Estabilización de la concentración de antitrombina en sangre y mantenimiento de los efectos terapéuticos durante al menos 10 meses en modelos animales.

Largo plazo: Se sugiere la posibilidad de un efecto terapéutico sostenido y duradero en pacientes humanos, aunque se necesitan más estudios para confirmar.

Imagen 1. Se seleccionó el locus AT como gen diana para el reequilibrio. Recuperado de: La administración in vivo de CRISPR-Cas9 mediante nanopartículas lipídicas permite la edición génica de la antitrombina para el tratamiento sostenible de la hemofilia A y B - PMC (nih.gov)

Referencia bibliográfica:

1.- Han JP, Kim M, Choi BS, Lee JH, Lee GS, Jeong M, et al. La administración in vivo de CRISPR-Cas9 mediante nanopartículas lipídicas permite la edición génica de la antitrombina para el tratamiento sostenible de la hemofilia A y B.[Internet]. [citado 18 de febrero de 2024]; Disponible en:La administración in vivo de CRISPR-Cas9 mediante nanopartículas lipídicas permite la edición génica de la antitrombina para el tratamiento sostenible de la hemofilia A y B - PMC (nih.gov)La administración in vivo de CRISPR-Cas9 mediante nanopartículas lipídicas permite la edición génica de la antitrombina para el tratamiento sostenible de la hemofilia A y B - PMC (nih.gov)

Terapia Regenerativa con Células Madre Mesenquimales (MSC) en la Artritis Reumatoide

Titulo: Efecto terapéutico de la administración intravenosa repetida a intervalos largos de células madre mesenquimales derivadas de la sangre del cordón umbilical humano en ratones DBA/1 con artritis inducida por colágeno

Tipo de Stem Cell:   células madre mesenquimales derivadas de la sangre del cordón umbilical (hUCB-­MSC)

Método de obtención: Aislamiento y cultivo de hUCB­-MSC.

Vía de administración:   inyección intravenosa de hUCB­-MSC

Resultados a corto, mediano y largo plazo: 

A corto plazo, reduce significativamente la gravedad de la Artritis Reumatoide. 

A medio plazo, puede mejorar la función articular y la calidad de vida.

A largo plazo, podría frenar el progreso de la enfermedad y reducir la necesidad de medicación inmunosupresora. Sin embargo, se necesitan más estudios para confirmar estos efectos a largo plazo

Imagen 1. Efectos inmunomoduladores de las células madre mesenquimales y sus factores secretados en la artritis reumatoide. Recuperado de: Click on image to zoom (nih.gov)

Referencia bibliográfica:

1.-  Yu Y, Yoon KA, Kang TW, Jeon HJ, Sim YB, Choe SH, et al. Efecto terapéutico de la administración intravenosa repetida a intervalos largos de células madre mesenquimales derivadas de la sangre del cordón umbilical humano en ratones DBA/1 con artritis inducida por colágeno. [Online]; 2019. Acceso 10 de febrerode 2024. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30959558/.

Ejemplo de ADN recombinante artificial y ejemplo de recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza

1.- Ejemplo de ADN recombinante para el diagnóstico de la Malaria.

La malaria es una enfermedad endémica en 91 países, siendo transmitida por la picadura de mosquitos, que transmiten a los parásitos del género Plasmodium, siendo las más frecuentes P. vivax y P. falciparum. Para su diagnóstico se emplean varias técnicas, y materiales, pero que demuestran baja sensibilidad, o baja sensibilidad y especificidad, como en la microscopía o detección de anticuerpos, es por ello que se emplea la tecnología del ADN recombinante para la clonación de diversas secuencias de Plasmodium y utilizarlas como controles en el diagnóstico molecular.

T: Clonacion de secuencias de Plasmodium para su uso como controles en el diagnóstico molecular

O: obtener secuencias clonadas de P.vivax y P. falciparum para su uso como controles en la técnica de PCR para el diagnóstico de malaria.

G:  ARN ribosomal de la subunidad pequeña de P. vivax 120 pb y P. falciparum 205 pb

ER: No menciona el artículo

EL: ADN ligasa T4

V: pGEM®-T Easy 

CR: Transformación, Procariota: Escherichia coli de la cepa XL1-Blue MRF`

MTG: transformación por choque térmico (30 min 4°C, 90 seg 42°C, 2 min 4°C).

MIC:  Cultivo, PCR multiplex, PCR de colonias y PCR de ADN 

plasmídico

  

2.- Ejemplo de recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza.

Las levaduras usan enzimas recombinasas para reparar roturas y generar diversidad genética en su ADN

Imagen 1. Corte de un grupo de células de Saccharomyces cerevisiae vistas a microscopio electrónico, esta imagen está coloreada artificialmente. Recuperado de: CIL:40654, Saccharomyces cerevisiae. CIL. Dataset (cellimagelibrary.org)

Referencia bibliográfica:

1.- Pacheco C, Ferrer E, Herrera F. CLONACIÓN DE SECUENCIAS DE Plasmodium PARA SU USO COMO. [Online]; 2019. Acceso 4 de Febrerode 2024. Disponible en:https://www.researchgate.net/profile/Cesar-Pacheco-6/publication/340492225_CLONACION_DE_SECUENCIAS_DE_Plasmodium_PARA_SU_USO_COMO_CONTROLES_EN_EL_DIAGNOSTICO_MOLECULAR_CLONING_OF_Plasmodium_SEQUENCES_FOR_ITS_USE_AS_CONTROLS_IN_THE_MOLECULAR_DIAGNOSIS/link.

2.- Sociedad Española de Microbiología. Diseño de un péptido señal mejorado para la producción de enzimas. [Online]; 2021. Acceso 4 de Febrerode 2024. Disponible en: https://digital.csic.es/bitstream/10261/266669/1/XVIII-Congreso-Nacional-de-Microbiologi%cc%81a_Molpeceres%20Garc%c3%ada_2021.pdf.

Análisis de Northern blot de miR-18a y miR-25 y su patrón mecanicista en la progresión del cáncer de hígado

El cáncer de hígado es uno de los más comunes en todo el mundo, producto de una desregulación de los microRNAs, sobre todo de miR-18a y miR-25 presentes en etapas tempranas. Para el análisis de Northern blot, se extrae el ARN mediante TRIzol, se ejecuta en geles de poliacrilamida desnaturalizantes al 12%, luego se transfiere a membranas de nailon (Ambion). Para la hibridación de las membranas se usaron sondas miR-18a y miR-25 (Sigma) marcadas con digoxigenina (DIG) y ARN U6 como control de carga. En conclusion los miR-18a y miR-25 pueden usarse como biomarcadores pronósticos para el cáncer de hígado en etapas tempranas.

Imagen 1. Análisis de Northern blot de muestras de pacientes con cáncer de hígado en estadio temprano, tardío y metastásico que expresan miR-18a y miR-25. El ARN U6 actúa como control para los experimentos. Recuperado de: Figura - PMC (nih.gov)

Referencias bibliográficas:

1.	Lu Y, Min Z, Qin A, Wu J, Jiang X, Qiao Z. Papel de la disrupción de miR-18a y miR-25 y su patrón mecanicista en la progresión del cáncer de hígado. [Online]; 2020. Acceso 24 de diciembre de 2023. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6987266/.

Aplicación de PCR y qPCR en la detección del VPH

Tema: Detección del VPH en muestras de mucosa oral en pacientes pediátricos

Objetivo: Evaluar la sensibilidad de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección del VPH en diferentes muestras.

Muestra: Mucosa oral 

Tipo de ácido nucleico: ADN viral.

Extracción: Se extrajo utilizando el kit de extracción de ADN genómico PureLink (Invitrogen, Carlsbad, California, EE. UU.), siguiendo las recomendaciones del fabricante.

Genes a analizar: Gen L1 

Tamaño en pares de base: 150 pb del gen a amplificar

Tipo de PCR: PCR convencional y PCR en tiempo real (qPCR).

Pasos:

40 ciclos 

- Desnaturalización: 15 segundos a 95 °C

- Hibridación: 30 segundos a 60 °C

- Elongación: 30 segundos a 72 °C

 Al final de los ciclos, las muestras se sometieron a análisis de disociación a 65°C-95°C.

Visualización:

 

 Referencia Bibliográfica:

 1. Gama AR. Detección del VPH en muestras de mucosa oral en pacientes pediátricos. [Online]; 2020. Acceso 16 de diciembrede 2023. Disponible en: https://www.scielo.br/j/jbpml/a/mkTHfmYWp9f4nXhzbCkfb9p/?format=html&lang=pt#

Alteraciones epigenéticas en el cáncer de ovario

La hipermetilación del gen supresor de tumores BRCA1 en el cáncer de ovario es una alteración epigenética importante, ya que una metilación anormal puede silenciar la expresión de BRCA1, contribuyendo a la inestabilidad genómica y aumentando el riesgo de desarrollar tumores

Imagen 1. Principales mutaciones asociadas al cáncer de ovario hereditario Recuperado de: https://rochepacientes.es/content/dam/roche-pacientes-2/es/assets/images/mutacion-cancer-ovario.png

Referencia Bibliográfica:

1. Sociedad Española de Oncologia Medica. Los avances en Cáncer de Ovario. [Online]; 2020. Acceso 07 de Diciembrede 2023. Disponible en:  https://seom.org/los-avances-en-cancer-de-ovario